摘  要　  目的：在老年性痴呆的发病中，年龄是最主要的危险因素，随年龄增长，发病率显著增高，衰老大鼠模型是比较接近老年性痴呆病理改变的动物模型。我们以往的实验证明：中药复方962胶囊(含何首乌、石葛蒲等六味中药)能显著改善老年大鼠记忆功能。本观察中药复方962胶囊对自然衰老大鼠模型海马CAI—CA4区神经生长因子(NGF)及其受体TrK A表达的，探讨中药复方962胶囊改善学习记忆功能的作用机理。：雌性Wistar大鼠老年为22月龄，青年为5月龄。阳性对照药为脑复康(piracetam)0.56g/kg，中药复方962胶套高剂量1.8g／kg，962胶囊低剂量0.9g／kg，每日灌胃给药一次，连续灌胃2个月，进行学习记忆实验(水迷宫)和旷场后，每组随机选取5只，灌注固定，冰冻切片，片厚40μm，每份标本均ABC法行NGF和TrK A免疫组化染色。采用法国Noesis Vision公司VISILOG5.0图象分析系统对组织切片进行分析。显微镜放大倍数为10×10，在海马CAl区锥体细胞层连续摄取3个视野，这三个视野包括了整个CAl区，记数3个视野内总阳性细胞数量、 阳性细胞总面积(象素单位)及阳性细胞灰度积分值(灰度单位)。海马CA2区连续摄取2个视野，海马CA3区连续摄取2个视野，海马CA4区摄取齿状回包含的1个视野，包括了整个CA2、CA3、CA4区。数据用均数±标准差表示(M±SD)，结果采用t检验。结果：①老年大鼠海马CAl、CA2、CA3、CA4区NGF表达较青年对照明显减少，阳性细胞数量为青年对照的19.89％，11.46％，6.65％和26.32％；阳性细胞总面积为青年对照的13.97％，6.76％，5.19％和25.01％；阳性细胞灰度积分值为青年对照的41.05％，35.49％，16，74％和29.17％。海马CAl、CA2、CA3、CA4区神经生长因子受体Trk A表达较青年对照也明显减少，阳性细胞数量为青年对照的12.42％，7.07％，9.26％和29.33％；阳性细胞总面积为青年对照的7.61％，4.92％，5.62％和23.79％；阳性细胞灰度积分值为青年对照的29，30％，18.70％，17.51％和34.19％。以CA2、CA3区的减少最严重。⑦中药复方962胶囊和脑复康均能提高老年大鼠海马CAl一CA4区NGF和Trk A阳性细胞数量、阳性细胞总面积和阳性细胞灰度积分值，962胶囊高剂量组基本恢复青年对照组水平。结论：老年大鼠神经生长因子(NGF)及其受体Trk A在海马区表达明显减少，可能与其学习记忆能力下降有关；中药复方962胶囊能够明显促进老年大鼠海马区NGF及受体TrK A表达，可能是改善其学习记忆功能的药基础。增强内源性神经营养物质的表达对老年性疾呆的治疗有重要意义。
关键词　中药　老年　大鼠神经生长因子　TrK A受体

前　言

　　老年性疾呆(Alzheimer’s disease。AD)是一种老年神经退行性疾病，临床以进行性记忆障碍和后天获得性知识丧失为特征，原因不明，尚元有效的治疗方法。自然衰老大鼠模型是比较接近老年性痴呆病理改变的动物模型。我们以往的实验证明：我室自行组方并研制的新复方962胶囊(含何首乌、石葛蒲等六味中药)能显著改善老年大鼠学习记忆功能。神经生长因子(nerve growth factor，NGF)在调节神经元生长和存活方面起着重要作用，AD过程中神经元的丢失至少部分是由于神经营养因子的缺乏。本文观察自然衰老大鼠脑内是否发生神经生长因子(NGF)及其受体Trk A表达的变化，以及962胶囊对内源性NGF及其受体Trk A表达的影响，探讨962胶囊改善学习记忆功能的作用机理。

　　 材料和方法

1  药品：　中药复方962胶囊，委托北京第四制药厂加工提供，批号：980515，每克干粉含生药量6.25克。实验时采用水溶解，动物灌胃量10m1／kg。阳性对照药品：脑复康    (piracetam)，由北京市曙光制药厂提供，批号：970618，京卫药准字(1996)第138050号。实    验时用水溶解配成0.056g／m1。

2  动物：　Wistar大鼠雌性，老年大鼠为22月龄(体重330±32g)，青年为5月龄(体重325±19g)。购于北京医科大学动物中心，动物证号：医动字01—3056。

3  试剂与主要仪器：　ABC试剂盒、神经生长因子(NGF)兔抗鼠抗体、酪氨酸蛋白激酶受    体A(Trk A，主要为NGF的受体)兔抗鼠抗体均购自北京中山试剂公司；恒温冷冻切片机为英国山盾公司ASE—620型，光学显微镜为NikonTE300型，图象分析系统为法国NoesisVision公司VISIUG5.0。

4  方法：
　　    (1)分组与给药：分组情况见表1，每日灌胃给药一次，灌胃2个月后，进行学习记忆实验(水迷宫)和旷场分析，然后灌注固定，取材进行组织形态学实验。

　表1  　大鼠分组给药情况

分组	给药	折合成人剂量的倍数
青年对照	水
老年模型	水
脑复康	脑复康(0.56g／kg)	7倍
962胶囊低剂量	962胶囊(0.9g／kg)	7倍
962胶囊高剂量	962胶囊(1.8g从g)	14倍

　　    (2)脑标本的免疫组化染色：每组随机选取5只，灌注固定，冰冻切片，片厚40μm，为冠状切面前囱后—4.4mm。PBS洗5分钟×3次，3％H202室温孵育10分钟，PBS洗5分钟×3次；8—10％封闭用羊血清孵育20分钟，吸出，加稀释好的一抗4℃过夜(一抗稀释度：NGFl：120，TrkAl：120)；PBS洗，加生物素化的兔二抗(1：200稀释)室温放置3小时3PBS洗，加辣根过氧化物酶标记的三抗(1：250稀释)孵育2小时；PBS洗，DAB显色2分钟，镜下控制染色程度；Carriz浅复染细胞核，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。阴性对照设立；分别以洗液和非免疫的正常鼠血清代替一抗进行免疫组化染色，余步骤同前。阳性反应为组织细胞结构呈棕黄色颗粒聚集。

　　    (3)图象分析处理：采用法国NoesisVision公司VISII。OG5.0图象分析系统对组织切片进行分析。显微镜放大倍数为10×10。在海马CAl区锥体细胞层连续摄取3个视野，这三个视野包括了整个CAl区，记数3个视野内总阳性细胞数量、阳性细胞总面积(象素单位)及阳性细胞灰度积分值(灰度单位)。海马CA2区连续摄取2个视野，海马帜3区连续摄取2个视野，海马CA4区摄取齿状回包含的1个视野，包括了整个CA2、CA3、CA4区。

　　(4)统计学处理：本研究均使用SPSS软件进行分析，数据用均数±标准差表示(M±SD)，    结果采用t检验。